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石蜡包埋组织是很重要的临床材料，一般用于研究其正常细胞和疾病相关的细胞，特别是癌细胞中标记蛋白的差异表达水平，对于判断癌化进展，癌症类型的判定，对于方便诊断和治疗有重要的意义，然而体外培养的细胞的蛋白差异表达水平并不能反映体内细胞的真实状况，因此从石蜡包埋组织中提取蛋白并且加以研究有很重要的意义，本试剂盒通过特殊的快速脱蜡试剂及蛋白质抽提试剂在两种不同的温度条件下温育，可以将被铰链的蛋白质释放出来，经过简单的离心步骤，上清中含有的蛋白经过沉淀洗涤和溶解后，可以用于Western Blot、SDS-PAGE、ELISA、2D电泳或蛋白质芯片分析等，本试剂盒可以使用50次左右。

• 不含有去污试剂，适用于非染色的标本；
  
• 可以适用于甲醛浸泡的组织标本；
  
• 不需要超速离心，可以同时处理多个标本。

• 为提高石蜡包埋组织中蛋白质的回收效率，必须尽量减少在切片制作过程中甲醛固定时间，同时在石蜡包埋前彻底脱水，甲醛固定的时间越长，蛋白质的提取回收效率越低。
  
• 尽量取用从石蜡包埋组织块中切取的薄片或没有封闭到载玻片上的没有经过苏木精等染色的切片。
  
• 材料越新鲜或甲醛固定时间越短，蛋白质的回收效率越高。
  
• 提取试剂中含有刺激性的化合物，操作时要戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻，若沾染皮肤眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
  
• 对于甲醛浸泡的组织样本，每次可以取5～10mg的组织样本，用双蒸水洗涤离心收集后，直接从步骤4开始操作。
  
• 提取的蛋白沉淀如果用于ELISA、RIA等免疫实验，可能需要先进行抗原修复程序，但是如果用Western Blot或Dot blot实验，一般情况下没有必要进行抗原修复程序。
  
• 其中预处理试剂A、预处理试剂B及沉淀试剂均有挥发性、易燃性并具有一定毒性，使用时请在通风橱中取用并做好防护措施。
  
• 产品中的保存条件及有效期均以未开封情况下计算，为了防止产品与空气接触发生化学反应影响产品性能，将未使用完毕的组分按存储要求保存同时建议开封后的组分尽快使用完毕。
  
• 使用后请旋紧瓶盖，防止溶液挥发和与空气中的物质发生化学反应。
  
• 本试剂盒只能够用于体外实验，不能够用于临床、治疗和动物体内实验等，由此产生的后果概不承担责任。

• 取两块大约10～15μm厚，100mm2石蜡包埋组织切片置于1.5mL的干净离心管中，加入1mL预处理试剂A，高速涡悬振荡30sec，室温静置5min，期间偶尔颠倒离心管数次。
  
• 加入100μL预处理试剂B，涡悬振荡10sec，再10000rpm(10000g)离心2min，移去上下两层的液体。
  
• 用500μL的双蒸水清洗脱蜡的组织两次，低速离心并尽量吸去液体，保留组织块沉淀。
  
• 加入100μL提取试剂，盖上盖子，涡悬振荡数秒。
  
• 在电热消解仪或水浴锅中100℃加热20min，短暂离心一下，再用组织研磨棒将切片组织磨碎。
  
• 在电热消解仪或水浴锅中60℃加热2h，期间大约每20min取出，振荡一次。
  
• 4℃，12000rpm(12830g)离心15min，小心将上清转移到一个新的1.5mL干净离心管中。
  
  • 在上清中的蛋白质可以在4℃的环境条件下保存一个星期，如果需要长期保存，请放置在-20℃的环境中，同时避免反复冻溶，也可以使用我司生产的非干扰型蛋白浓度测定试剂盒(GS1485)对上清中的蛋白质直接定量。
• 加入1mL的沉淀试剂，涡悬振荡10sec，在4℃的环境中保持10min。
  
• 转置于4℃，12000rpm离心15min，去除上清保留沉淀。
  
• 加入0.5mL的沉淀试剂，涡悬振荡10sec，在4℃的环境中保持10min，再转置于4℃，12000rpm离心15min，去除上清保留沉淀，在通风橱中将试管倒置在滤纸上，让残余的液体挥发干净。
  
• 将固体沉淀溶解于合适的缓冲液中，再转置于4℃，12000rpm离心5min，收集上清，用于SDS-PAGE，Western blot等实验。
  
  • 此上清中含有DNA，RNA残留，所以溶液有些发粘，加入少量的micrococcal nuclease，benzonase等消化，有助于减少粘性，但是即使不处理一般不会影响后续实验，用枪头将沉淀捣碎，同时加入含有Thiourea，Urea，NDSB-201或其它含有强溶解能力的去污试剂的缓冲液有利于沉淀的完全溶解。